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內容簡介: |
《分子生物学实验》分为分子生物学实验技术及原理、分子生物学实验及分子生物学软件应用三篇。第二篇分子生物学实验内容包括DNA操作实验、RNA操作实验、蛋白质研究相关实验、基因表达与调节实验、转基因实验、细胞研究实验。各个实验章节的编排尽量按实验目的、实验原理、实验器材/试剂、实验步骤、实验结果、注意事项和思考题统一格式。《分子生物学实验》注重所述实验方法的常用性与先进性,同时注重语言的简洁性与条理性,以保证实验方法的可操作性。
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目錄:
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目录
篇分子生物学实验技术及原理
章常用工具与方法1
节载体1
第二节常用工具酶9
第三节电泳14
第二章核酸操作技术21
节DNA的定性和定量分析21
第二节RNA的定性和定量分析30
第三节DNA重组技术40
第四节核酸文库构建44
第三章蛋白质研究技术52
节蛋白质分离与纯化52
第二节蛋白质定量56
第三节蛋白质免疫印迹61
第四节流式细胞分析技术64
第五节免疫共沉淀67
第四章基因功能研究相关技术71
节基因表达与调节71
第二节转基因技术78
第三节基因敲除81
第四节基因沉默84
第五章细胞研究技术88
节细胞培养88
第二节细胞凋亡的检测91
第二篇分子生物学实验
第六章DNA操作实验95
实验一质粒DNA的微量快速提取95
实验二外周血白细胞DNA的微量快速提取(离心柱法)97
实验三质粒DNA的酶切与鉴定98
实验四聚合酶链反应技术(PCR)100
实验五DNA序列测定(双脱氧测序银染法)101
实验六DNA印迹杂交技术(Southern印迹法)106
实验七DNA重组与鉴定110
实验八克隆化DNA的定点突变实验113
第七章RNA操作实验116
实验一肝总RNA的制备116
实验二Northern印迹法118
实验三利用RT-PCR对大鼠肝组织SOD基因进行半定量分析121
实验四实时荧光定量PCR(法)检测大鼠不同组织中碱性成纤维细胞生长因子bFGF基因表达水平的差异123
实验五cDNA文库构建128
第八章蛋白质研究相关实验134
实验一血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定134
实验二肝组织蛋白质定量136
实验三小鼠肝β-actin蛋白免疫印迹检测140
实验四免疫组织化学144
实验五免疫荧光染色方法146
实验六流式细胞仪对血小板活化的测定148
实验七免疫共沉淀151
第九章基因表达与调节实验154
实验一利用荧光素酶报告基因系统检测启动子的转录活性154
实验二染色质免疫沉淀技术156
实验三DNA甲基化特异性PCR158
实验四Red同源重组技术对大肠埃希菌ClpP基因的敲除162
实验五siRNA技术沉默基因163
实验六microRNA技术沉默基因165
第十章转基因实验168
实验一绿色荧光蛋白基因真核表达载体的构建及其在酿酒酵母中的表达168
实验二原核表达载体构建173
实验三哺乳动物细胞的转染178
实验四用电穿孔方法将重组质粒转化细菌179
实验五克隆化基因在大肠埃希菌的诱导表达180
实验六转基因动物的建立181
第十一章细胞研究实验185
实验一小鼠原代细胞培养185
实验二细胞培养实验186
实验三细胞凋亡检测187
第三篇分子生物学软件应用
第十二章PCR引物设计及相关软件使用190
第十三章核酸序列分析与预测203
节核酸序列分析一般内容203
第二节miRNA序列数据库及靶点预测219
第十四章蛋白质序列分析与结构预测225
节蛋白质序列分析225
第二节二级结构及三级结构预测234
第十五章科研论文中的图片处理240
节基本概念240
第二节图片的获取与保存241
第三节图片的修复、编排与标注242
第四节图片的制作规范242
第五节结语242
第十六章EndNote软件的安装及其在医学文献管理和科研写作中的应用243
节EndNoteⅩ7的安装243
第二节EndNoteⅩ7的简介245
第三节EndNoteⅩ7的使用247
参考文献259
附录260
附录1分子生物学实验室常用设备介绍260
附录2分子生物学及基因工程常用试剂276
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