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《动物病毒样颗粒技术》将纳米技术概念引入动物疫苗研究领域在国内尚属首次，共包括14章，详细介绍了病毒样颗粒的基本特征及其在基础研究、药物呈递、疫苗工程等方面的应用价值，系统描述了应用杆状病毒-昆虫细胞表达系统、酵母表达系统、活病毒载体表达系统、哺乳动物细胞表达系统、植物表达系统、原核表达系统、无细胞蛋白质合成表达系统等制备病毒样颗粒的策略、步骤或程序，同时还介绍了目的蛋白纯化鉴定的基本方法及产业化生产病毒样颗粒应注意的问题和解决思路。
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目录第一章绪论1第一节病毒样颗粒的概念及特点1一、病毒样颗粒的概念1二、病毒样颗粒的特点及优势1三、病毒样颗粒的不足2第二节病毒样颗粒的分类3第三节病毒样颗粒的发展历程3一、病毒样颗粒技术的进展3二、病毒样颗粒相关表达系统的发展4三、病毒样颗粒组装技术的发展5参考文献6第二章杆状病毒-昆虫细胞表达系统9第一节概述9一、杆状病毒-昆虫细胞表达系统的优点9二、杆状病毒载体9三、宿主11四、外源基因的表达13第二节杆状病毒-昆虫细胞表达技术13一、杆状病毒-昆虫细胞表达系统的发展13二、高效表达策略15第三节Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的VLP制备17一、载体的选择17二、目的基因的克隆21三、培养昆虫细胞21四、重组bacmid的构建21五、使用PCR分析重组质粒22六、VLP的制备23第四节杆状病毒-昆虫细胞表达系统在VLP研究中的进展24一、无囊膜病毒26二、囊膜病毒28三、瓶颈和问题30四、展望34五、附录34参考文献41第三章酵母表达系统44第一节概述44一、酵母表达系统简介44二、常用酵母表达系统分类47第二节酵母表达技术55一、酵母表达技术概述55二、酵母表达技术的高效表达策略56第三节酵母表达系统在VLP研究中的进展61一、概述61二、酵母表达系统在人源病毒VLP中的研究62三、酵母表达系统在动物病毒VLP中的研究65第四节展望68参考文献69第四章活病毒载体表达系统74第一节痘病毒表达系统74一、痘病毒的分类74二、痘病毒基因组特点74三、痘病毒表达载体及其应用75第二节腺病毒表达系统80一、腺病毒生物学特点80二、腺病毒的分类81三、腺病毒感染及免疫应答机制83四、重组腺病毒的构建85五、腺病毒表达系统在VLP研究中的进展85第三节腺相关病毒表达系统86一、腺相关病毒病原学特点87二、腺相关病毒衣壳组装87三、腺相关病毒诱导的免疫应答88四、重组腺相关病毒制备89五、腺相关病毒递送系统的应用92六、腺相关病毒递送系统发展展望94第四节慢病毒表达系统94一、慢病毒表达系统概述95二、重组慢病毒制备与生产97三、慢病毒表达系统的应用101四、慢病毒载体系统发展展望103五、附录103参考文献105第五章哺乳动物细胞表达系统108第一节CHO细胞表达系统108一、CHO细胞表达载体特征111二、宿主细胞的优化113三、真核表达载体转染技术113四、哺乳动物细胞培养条件115五、CHO制备VLP研究的进展116第二节HEK293细胞表达系统119一、HEK293细胞系发展历史119二、HEK293细胞表达载体特征121三、HEK293生产蛋白质制剂的优点122四、HEK293真核表达载体的转染123五、HEK293细胞制备VLP的研究进展123第三节细胞培养工艺研究129一、细胞培养环境的控制129二、生物反应器130三、动物细胞流加培养工艺131四、流加培养的细胞代谢及其基因调控132第四节稳定表达重组蛋白的哺乳动物细胞系133一、利用绿色荧光蛋白（GFP）构建稳定表达细胞系134二、利用慢病毒转导构建稳定表达细胞系135三、利用噬菌体φC31整合酶构建稳定表达细胞系135四、利用转座子构建稳定表达细胞系136五、问题136第五节展望136参考文献137第六章植物表达系统140第一节植物表达系统概述140一、植物表达系统的组成140二、植物表达系统种类142第二节植物表达系统表达技术143一、植物表达系统常用载体及工程菌株143二、提高目的蛋白表达水平的手段146三、植物表达系统表达重组蛋白纯化工艺149第三节植物表达系统在VLP中的研究进展151一、囊膜病毒153二、无囊膜病毒159第四节展望162参考文献163第七章原核表达系统166第一节大肠杆菌表达系统概述及技术166一、大肠杆菌表达系统的组成166二、大肠杆菌表达系统高效表达的策略169三、VLP在大肠杆菌表达系统中的表达与组装173第二节其他原核表达系统（乳酸菌、链霉菌）概述及技术174一、乳酸菌175二、链霉菌179第三节原核表达系统在VLP中的研究进展181一、囊膜病毒181二、无囊膜病毒184第四节展望189参考文献190第八章无细胞蛋白质合成系统195第一节无细胞蛋白质合成系统发展史195第二节无细胞蛋白质合成系统的优点和不足197一、CFPS的优点197二、CFPS存在的问题197第三节无细胞蛋白质合成系统分类及研究进展198一、细胞提取物来源CFPS199二、“PURE”系统CFPS203三、CFPS的生产方式204第四节CFPS的主要应用领域205一、特殊蛋白质的合成205二、蛋白质高通量表达和筛选206三、合成药物207第五节CFPS在VLP制备中的研究进展207一、无囊膜病毒207二、囊膜病毒209第六节展望212参考文献212第九章病毒样颗粒的表征技术215第一节概述215第二节生物化学分析技术216一、MS技术216二、SDS-PAGE技术218三、RP-HPLC技术219第三节生物物理学分析技术220一、TEM220二、Cryo-EM221三、AFM222四、DLS技术224五、圆盘离心技术225六、ES-DMA技术226七、AF4技术227八、Native-PAGE技术229九、密度梯度离心技术229十、AUC技术232第四节免疫生物学分析技术234一、ELISA技术234二、SPR技术235参考文献237第十章动物病毒样颗粒疫苗241第一节VLP疫苗概述241一、VLP疫苗的优势241二、VLP疫苗的多样性242三、VLP疫苗的应用246四、VLP疫苗的分类249五、展望251第二节VLP的免疫机制251一、抗原呈递细胞的种类、功能251二、抗原呈递细胞在VLP疫苗免疫中的作用254三、B细胞及VLP诱导的B细胞免疫应答255四、主要组织相容性复合体257五、抗原呈递途径258六、T细胞及VLP诱导的T细胞免疫应答259第三节VLP疫苗的研究261一、人类与人畜共患病VLP疫苗262二、猪的VLP疫苗274三、反刍动物的VLP疫苗279四、禽类的VLP疫苗282五、兔、鱼、犬、貂和猫的VLP疫苗287参考文献292第十一章病毒及病毒样颗粒作为纳米药物递送载体305第一节纳米药物递送系统概述305一、纳米药物递送系统305二、常见纳米药物递送载体的分类及特性311三、病毒及病毒样颗粒类纳米药物递送载体314第二节病毒及病毒样颗粒承载药物的机制和原理316一、从材料学与化学的角度看VNP/VLP316二、VNP/VLP的解离-自组装特性317三、物理吸附法317四、化学修饰法318第三节病毒及病毒样颗粒作为纳米药物递送载体的研究进展322一、植物VNP/VLP作为纳米药物递送载体322二、人/动物VNP/VLP作为纳米药物递送载体334三、噬菌体VNP/VLP作为纳米药物递送载体340四、展望345参考文献345第十二章病毒样颗粒作为核酸的递送载体348第一节核酸类药物简介348一、核酸类药物与基因治疗348二、核酸类药物的现状和前景349三、核酸类药物递送载体研究现状350四、病毒样颗粒作为核酸类药物递送载体352第二节病毒样颗粒递送核酸的机理和方法353一、病毒样颗粒递送核酸的机理353二、病毒样颗粒递送核酸的方法356第三节病毒样颗粒递送DNA的研究进展357一、病毒样颗粒递送DNA的研究358二、病毒样颗粒递送DNA在人类病毒中的应用360第四节病毒样颗粒递送RNA的研究进展365一、病毒样颗粒递送RNA在人和动物中的应用365二、病毒样颗粒递送RNA在植物中的应用367三、病毒样颗粒递送基因短片段的研究367第五节展望与不足371参考文献372第十三章病毒及病毒样颗粒作为新型功能纳米元/器件375第一节病毒及病毒样颗粒与量子点375一、量子点概述375二、病毒及病毒样颗粒-量子点复合物378三、病毒及病毒样颗粒-量子点复合物的研究进展379第二节病毒及病毒样颗粒与金纳米颗粒385一、金纳米颗粒概述385二、病毒及病毒样颗粒-金纳米颗粒复合物的研究进展385第三节病毒及病毒样颗粒在磁共振成像中的应用394一、磁共振成像概述394二、VNP/VLP与T1造影剂397三、VNP/VLP与T2造影剂400第四节病毒样颗粒与多模态成像404一、多模态成像概述404二、VNP/VLP在多模态成像中的应用406三、展望410参考文献410第十四章病毒样颗粒在基础研究中的应用413第一节病毒样颗粒的结构解析413一、戊型肝炎病毒样颗粒的结构413二、尼帕病毒样颗粒的结构415三、β-诺达病毒样颗粒的结构416四、猪圆环病毒样颗粒的结构418五、柯萨奇B3病毒样颗粒的结构419六、展望420第二节病毒样颗粒的组装机制研究421一、静电作用力421二、渗透压422三、核酸片段423四、温度和pH425五、热休克蛋白426六、谷胱甘肽426七、展望427第三节病毒样颗粒模拟病毒的研究427一、病毒样颗粒模拟病毒的生命周期428二、病毒样颗粒模拟病毒的组织嗜性429三、病毒样颗粒模拟病毒活化免疫应答430四、展望433参考文献433
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