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| 編輯推薦： |
总结目前结核病实验室检验存在问题
全面介绍结核病实验室检验有效经验
国内各级结核病实验室必备
结核病实验室检验人员必读
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| 內容簡介： |
本书对结核病及相关病原菌实验室检测相关知识做了详细介绍，共13 章、250幅图，包括结核病及实验室安全防护，分枝杆菌特性及临床送检标本检测、培养、菌种鉴定、药敏试验、各种培养基成分和配制方法等实操性内容，附录部分还推荐介绍部分结核病相关资料查询网站、参考书籍，并对结核病实验室检测人员在日常检测工作中遇到的常见检测问题做了解答。
书中介绍的结核病实验室检测方法简便易行，对临床常用标本前处理、抗酸杆菌涂片方法及培养阳性后标本的处理进行了改进和创新，可显著提高结核分枝杆菌的阳性率，易被实验室人员掌握，让结核病患者尽早得到明确的病原学诊断，及早得到治疗，避免结核分枝杆菌在人与人之间的传播。
本书可供结核病实验室检测相关技术人员、结核病临床医生和研究人员日常查阅，也可供医学院校检验系专业师生阅读参考。
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| 關於作者： |
卢洪洲，1966年生，主任医师、二级教授、内科学博士、留美博士后、内科学博士生导师、护理学博士生导师、博士后流动站站长、公共卫生管理硕士生导师、公共卫生法律硕士生导师。入选国家百千万人才工程、教育部长江学者，享受国务字特殊津贴，获评“有突出贡献中青年专家”。曾任上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心副主任兼感染科主任，现任上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心党委书记、复旦大学附属华山医院院长助理。
钱雪琴，1972年生，毕业于复旦大学上海医学院，硕士研究生，副主任技师。现任上海市（复旦大学附属）公共卫生临床中心医学检验科副主任。兼任第一届长三角疑难病原微生物鉴定专家委员会学术委员。从事微生物检验工作20年，主要负责结核病实验室检测工作。先后在复旦大学附属华山医院检验科、皮肤科真菌实验室和香港威尔斯亲王医院进修、学习。
黄海荣，医学博士，研究员，教授，博士生导师，首都医科大学附属北京胸科医院国家结核病临床实验室主任。主要从事结核病实验室诊断及相关基础研究工作，曾于美国科罗拉多州立大学从事博士后课题研究。先后主持国家自然科学基金、美国NIH RePORT项目等课题；入选北京市“科技新星”计划、北京市医院管理中心“登峰”人才计划；先后任WHO体外诊断策略咨询委员会专家、中华医学会结核病学分会基础研究专业委员会主任委员、国家药品监督管理局诊断试剂评审专家等多项学术任职；任BMC Infectious Disease 副主编。
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| 目錄：
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第一章 结核病概述
一、 结核病的历史 .........................................................................................................1
二、 结核病的流行病学及宿主易感因素 .....................................................................2
三、 结核病相关的疫苗研究 .........................................................................................3
四、 结核病的临床表现 .................................................................................................4
五、 结核病的诊断 .........................................................................................................5
六、 结核病的治疗 .........................................................................................................5
第二章 结核病实验室安全防护
一、 实验室存在的危险 .................................................................................................7
二、 实验室设施和设备要求 .........................................................................................8
三、 实验室设计原则及基本要求 .................................................................................8
四、 个人防护 .................................................................................................................9
五、 进入实验室的要求 .................................................................................................9
六、 实验室操作要求 .....................................................................................................9
七、 实验室常用设备的正确使用和意外处理 ...........................................................10
八、 常用消毒杀菌方法 ................................................................................................11
第三章 分枝杆菌特性
第一节 结核分枝杆菌的生物学特性 ...................................................................................13
一、 染色与形态 ...........................................................................................................14
二、 培养特性 ...............................................................................................................15
三、 生化反应 ...............................................................................................................16
四、 变异性 ...................................................................................................................16
五、 抵抗力与消毒 .......................................................................................................17
第二节 非结核分枝杆菌的生物学特性 ...............................................................................17
一、 分类 .......................................................................................................................18
二、 形态 .......................................................................................................................18
三、 培养特性 ...............................................................................................................18
四、 致病性 ...................................................................................................................19
五、 药物敏感性 ...........................................................................................................19
六、 常见非结核分枝杆菌 ...........................................................................................19
第四章 临床送检标本采集、运送和保存
一、 呼吸道标本的采集 ...............................................................................................23
二、 肺外标本的采集 ...................................................................................................25
三、 标本采集注意事项、运送及保存 .........................................................................26
第五章 抗酸杆菌涂片、染色及显微镜检查
第一节 抗酸杆菌涂片处理方法及局限性分析 ...................................................................28
一、 概述 .......................................................................................................................28
二、 涂片镜检的优缺点 ...............................................................................................28
三、 直接涂片法 ...........................................................................................................29
四、 漂浮集菌法 ...........................................................................................................30
五、 离心沉淀法 ...........................................................................................................31
六、 消化后离心沉淀法 ...............................................................................................31
七、 涂片注意事项 .......................................................................................................35
第二节 抗酸染色及显微镜检查 ............................................................................................36
一、 萋—尼抗酸染色 .....................................................................................................36
二、 改良萋—尼抗酸染色 .............................................................................................37
三、 Kinyoun抗酸染色.................................................................................................37
四、 潘本汉（Pappenheim）抗酸染色 ..........................................................................38
五、 弱抗酸染色 ...........................................................................................................38
六、 卡贝托（Gabbet）抗酸染色 ..................................................................................39
七、 改良I—K抗酸染色 ................................................................................................39
八、 显微镜镜检 ...........................................................................................................40
九、 结果判断 ...............................................................................................................40
十、 结果判读 ...............................................................................................................40
十一、 痰涂片抗酸杆菌浓度与涂阳概率 ...................................................................40
十二、 读片时间与镜检阳性率的关系 .......................................................................41
十三、 不同离心力对涂片镜检及培养结果的影响 ...................................................41
十四、 标本中不同抗酸杆菌抗酸染色形态汇总 .......................................................41
第三节 荧光染色及显微镜检查 ............................................................................................45
一、 原理及特点 ...........................................................................................................45
二、 LED荧光显微镜与传统荧光显微镜比较 ...........................................................46
三、 金胺O染色 ...........................................................................................................46
四、 金胺O—罗丹明染色 ..............................................................................................47
五、 镜检 .......................................................................................................................47
六、 结果判断 ...............................................................................................................47
七、 结果判读 ...............................................................................................................47
八、 荧光染色优越性 ...................................................................................................48
九、 荧光染色局限性 ...................................................................................................48
十、 标本中不同抗酸杆菌荧光染色形态汇总 ...........................................................49
第四节 质量控制 .....................................................................................................................54
一、 室内质控 ...............................................................................................................54
二、 室间比对 ...............................................................................................................55
三、 注意事项 ...............................................................................................................55
第五节 抗酸杆菌涂片假阳性、假阴性原因分析及处理措施 ...........................................55
一、 假阳性原因分析及预防措施 ...............................................................................55
二、 假阴性原因分析及预防措施 ...............................................................................56
第六章 分枝杆菌培养
第一节 分枝杆菌培养概述 ....................................................................................................59
一、 概述 .......................................................................................................................59
二、 不同化学物质对分枝杆菌的生长影响 ...............................................................59
第二节 临床标本前处理方法 ................................................................................................61
一、 概述 .......................................................................................................................61
二、 分枝杆菌培养去污染方法 ...................................................................................62
第三节 分枝杆菌培养基种类及介绍 ...................................................................................67
一、 概述 .......................................................................................................................67
二、 商品化快速培养、药敏检测系统 .........................................................................67
三、 液体变色培养基 ...................................................................................................68
四、 固体培养基 ...........................................................................................................68
五、 双相培养基 ...........................................................................................................69
六、 常用培养基成分介绍 ...........................................................................................69
第四节 分枝杆菌固体培养操作程序 ...................................................................................71
一、 试剂、培养基与耗材 .............................................................................................71
二、 标本前处理 ...........................................................................................................72
三、 标本接种 ...............................................................................................................73
四、 结果观察 ...............................................................................................................74
五、 报告方式 ...............................................................................................................74
六、 注意事项 ...............................................................................................................74
七、 室内质控 ...............................................................................................................75
八、 罗氏培养基上结核分枝杆菌、非结核分枝杆菌、诺卡菌及常见
污染杂菌菌落及镜检形态汇总 ..........................................................................76
第五节 BACTEC MGIT 960 System全自动分枝杆菌检测/
药敏系统操作程序 ....................................................................................................89
一、 概况及检测原理 ...................................................................................................89
二、 仪器硬件系统 .......................................................................................................89
三、 实验准备 ...............................................................................................................90
四、 标本前处理 ...........................................................................................................90
五、 标本接种 ...............................................................................................................91
六、 结果报告 ...............................................................................................................91
七、 质量控制 ...............................................................................................................91
八、 仪器状态检查及保养 ...........................................................................................92
九、 检测局限性 ...........................................................................................................92
十、 BACTEC MGIT 960 System培养结核分枝杆菌、非结核分枝
杆菌、诺卡菌及常见污染杂菌菌落及镜检形态汇总 ........................................93
第六节 BACTEC 9120全自动血培养仪 ..........................................................................98
一、 原理 .......................................................................................................................98
二、 标本培养检测的操作步骤 ...................................................................................98
三、 报警及错误处理 ...................................................................................................99
四、 仪器报阳瓶处理 .................................................................................................101
五、 结果报告 .............................................................................................................101
六、 质量控制 .............................................................................................................101
七、 注意事项 .............................................................................................................102
八、 BACTEC 9120培养结核分枝杆菌、非结核分枝杆菌镜检形态汇总 ..............103
第七节 分枝杆菌培养报阳后标本的处理 .........................................................................105
一、 BACTEC MGIT 960报阳后标本的处理 ...........................................................105
二、 血培养报阳后标本的处理 .................................................................................106
三、 罗氏培养阳性菌株转种方法推荐 .....................................................................106
四、 罗氏培养阳性菌株涂片方法推荐 .....................................................................107
第八节 分枝杆菌培养结果影响因素分析 .........................................................................107
一、 假阳性原因分析及处理措施 .............................................................................107
二、 假阴性原因分析及处理措施 .............................................................................108
三、 分枝杆菌培养注意事项 .....................................................................................109
四、 不同培养基培养分枝杆菌敏感性差异比较 .....................................................109
五、 提高分枝杆菌培养检出率的方法 .....................................................................109
第七章 分枝杆菌菌种鉴定
第一节 传统鉴定方法及局限性介绍 ..................................................................................111
一、 结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌的区别 ..........................................................111
二、 结核分枝杆菌和牛分枝杆菌鉴定 ......................................................................113
三、 偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌和脓肿分枝杆菌鉴定 ............................................114
四、 分枝杆菌鉴定流程图 ..........................................................................................115
第二节 分枝杆菌免疫学检查 ...............................................................................................115
一、 PPD结核菌素皮肤试验介绍及局限性分析 ......................................................115
二、 γ干扰素释放试验（IGRA） ..................................................................................116
三、结核抗原检测及局限性 .....................................................................................121
四、
四、 结核抗体检测及局限性 .....................................................................................123
第八章 分枝杆菌核酸检测及局限性分析
第一节 结核分枝杆菌复合群分子鉴定 .............................................................................125
一、 用于结核分枝杆菌复合群鉴定的DNA序列 ...................................................125
二、 用于结核分枝杆菌复合群鉴定的技术 .............................................................126
第二节 非结核分枝杆菌菌种分子鉴定 .............................................................................128
一、 用于非结核分枝杆菌菌种分子鉴定的DNA序列 ...........................................128
二、 用于非结核分枝杆菌菌种分子鉴定的技术 .....................................................129
第三节 结核分枝杆菌耐药性分子检测 .............................................................................130
一、 用于结核分枝杆菌耐药性分子检测的DNA序列 ...........................................130
二、 用于结核分枝杆菌耐药性分子检测的技术 .....................................................131
第九章 MALDI—TOF MS技术在分枝杆菌鉴定中的应用
第一节 MALDI Biotyper在分枝杆菌鉴定中的应用.....................................................142
一、 基本原理与流程 .................................................................................................142
二、 在分枝杆菌鉴定中的应用 .................................................................................144
第二节 VITEK MS在分枝杆菌鉴定中的应用 ................................................................148
一、 方法及原理 .........................................................................................................148
二、 样本处理方法 .....................................................................................................148
三、 结果判读 .............................................................................................................150
四、 操作及结果判读注意事项 .................................................................................150
第十章 抗分枝杆菌药物及作用特点
第一节 抗结核分枝杆菌药物及作用特点 .........................................................................151
一、 异烟肼 .................................................................................................................152
二、 乙胺丁醇 .............................................................................................................152
三、 吡嗪酰胺 .............................................................................................................153
四、 利福霉素类 .........................................................................................................154
五、 氨基糖苷类 .........................................................................................................155
六、 卷曲霉素 .............................................................................................................156
七、 对氨基水杨酸 .....................................................................................................156
八、 氯法齐明 .............................................................................................................157
九、 乙硫异烟胺、丙硫异烟胺 ...................................................................................157
十、 环丝氨酸 .............................................................................................................157
十一、 氟喹诺酮类 .....................................................................................................158
十二、 利奈唑胺 .........................................................................................................159
十三、 贝达喹啉 .........................................................................................................159
第二节 抗非结核分枝杆菌药物及作用特点 .....................................................................160
一、 大环内酯类 .........................................................................................................160
二、 四环素类 .............................................................................................................161
三、 磺胺类 .................................................................................................................162
四、 β—内酰胺类 .........................................................................................................162
五、 小结 .....................................................................................................................163
第十一章 结核分枝杆菌耐药性及耐药机制
第一节 结核分枝杆菌耐药性 ..........................................................................................167
一、 概述 ................................................................................................................167
二、 耐药特点 ........................................................................................................167
第二节 结核分枝杆菌耐药机制 ......................................................................................168
一、 概述 ................................................................................................................168
二、 固有性耐药 ....................................................................................................169
三、 获得性耐药 ....................................................................................................171
四、 其他机制 ........................................................................................................173
五、 系统生物学 ....................................................................................................174
六、 小结 ................................................................................................................174
第十二章 分枝杆菌药物敏感性表型检测
第一节 结核分枝杆菌的表型药敏试验 .........................................................................178
一、 固体药敏试验 ................................................................................................179
二、 液体培养基药敏试验 ....................................................................................180
三、 其他类型的表型药敏试验方法 ....................................................................181
四、 表型药敏试验的技术局限性 ........................................................................183
第二节 结核分枝杆菌药敏试验操作 .............................................................................185
一、 目的 ................................................................................................................185
二、 处理原则 ........................................................................................................185
三、 比例法固体药敏试验 ....................................................................................185
四、 液体药敏试验 ................................................................................................187
五、 质量控制 ........................................................................................................188
六、 实验后的处理 ................................................................................................189
七、 注意事项 ........................................................................................................189
第三节 非结核分枝杆菌表型药敏试验 .........................................................................190
结核病实验室检测与图解
一、 NTM药敏试验方法 .......................................................................................192
二、 NTM不同菌种药敏试验方法 .......................................................................193
第四节 Sensititre结核分枝杆菌/非结核分枝杆菌药敏试验介绍 ........................198
一、 方法原理 ........................................................................................................198
二、 适用范围 ........................................................................................................198
三、 样本要求 ........................................................................................................199
四、 仪器设备 ........................................................................................................199
五、 试剂耗材 ........................................................................................................199
六、 操作步骤 ........................................................................................................199
七、 质量控制 ........................................................................................................201
八、 检验方法的局限性 ........................................................................................205
九、 注意事项 ........................................................................................................205
十、 临床意义 ........................................................................................................205
附件一：菌落计数程序 ........................................................................................206
附件二：药敏板药物分布表 ................................................................................206
第十三章 重要培养基配制
第一节 固体培养基的配制 ..............................................................................................209
一、 中性罗氏培养基 ............................................................................................209
二、 酸性罗氏培养基 ............................................................................................210
三、 丙酮酸钠罗氏培养基 .....................................................................................211
四、 小川（Ogawa）培养基 ....................................................................................212
五、 苏通（Sauton）培养基 ....................................................................................212
六、 Middlebrook 7H10与7H11琼脂培养基 .......................................................212
七、 ATS培养基（American Trudeau Society）用于分枝杆菌培养 .....................214
八、 改良TSA—L培养基（适用于L型分枝杆菌培养） ........................................214
第二节 液体培养基配制 ..................................................................................................215
一、 Middlebrook 7H9液体培养基 .......................................................................215
二、 液体Dubos培养基 .........................................................................................217
三、 改良柯尔施纳（Kirschner）培养基 ................................................................218
四、 改良普罗斯考尔（Pros—Kaur和Beck）培养基 .............................................218
五、 92—3 TB—L液体培养基 .................................................................................218
六、 92—3 TB—B液体培养基配方 .........................................................................219
第三节 固体鉴定培养基的配制 ......................................................................................219
一、 对硝基苯甲酸（PNB）罗氏培养基 ................................................................219
二、 噻吩—2—羧酸肼（TCH）罗氏培养基 .............................................................220
三、 苦味酸培养基 ................................................................................................220
四、 谷氨酸钠琼脂培养基 ....................................................................................221
五、 5%的氯化钠罗氏培养基 ...............................................................................221
第四节 固体药敏培养基的配制 ......................................................................................222
一、 固体药敏培养基 ............................................................................................222
二、 吡嗪酰胺药敏培养基 ....................................................................................224
第五节 液体药敏培养基的配制 ......................................................................................225
一、 培养基制备 ....................................................................................................225
二、 质量控制 ........................................................................................................226
三、 注意事项 ........................................................................................................226
附录一 菌株保存 228
附录二 分枝杆菌检测参考书介绍 229
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结核病是当今全球范围内对人类具有威胁性的一种传染性疾病，是危害人类健康的主要杀手之一，同时也是单一传染病中的头号杀手（排在AIDS之前），位列全球十大死因之一。早期正确的诊断是结核病防控工作的重要基础。结核病的诊断除结合患者的临床症状和病史资料外，还需要借助于细菌学、影像学、分子生物学、免疫学等多种检测方法或技术。
在日常检测中，我们发现有些经典的检测方法如抗酸杆菌涂片法，存在标本如胸水、腹水、脑脊液、尿液等染色时的标本脱落现象，造成阳性率极低。还有培养报阳后标本的处理，如果不改进处理方法，很容易得出培养阴性结果。同时，目前市面上关于结核病实验室检测的指导性图书不多，一些新的检测技术缺少详细的介绍，这些技术没有在基层医院检验科得到广泛应用，在我国诊断的结核病患者中有病原学依据的比例还有较大的提升空间。因此，实验室人员及临床医生急需一本切实可行的，对目前的结核病检测技术细节描写、优缺点介绍、操作注意事项以及可选用的最新检测技术作专门介绍的图书。为解决在检测、诊疗过程中出现的上述问题，提高结核杆菌检出率，减少肺结核的传播，我们编写了这本《结核病实验室检测与图解》，希望能给相关人员予以相应的帮助。
全书共13章，36.2万字，250幅图片，多角度、多层次对结核病实验室检测和诊断技术进行了系统的介绍。本书宗旨在于强调和普及病原学诊断，在介绍结核病细菌学检验技术的基础上，结合作者的工作经验，对传统的抗酸杆菌涂片、培养操作及结果观察等方面进行改进、创新，以提高抗酸杆菌的检出率，让结核病患者及早得到确诊、及早治疗。本书内容较为全面，有较强的实用性、操作性和指导性，适合各级医疗机构结核病实验室检测人员、临床医
生、疾病预防控制中心结核病防治人员、结核病研究人员、医学院校检验专业师生阅读参考。
我们特邀复旦大学附属华山医院翁心华教授和中国疾病预防控制中心结核病预防控制中心主任赵雁林研究员担任主审，两位主审均为我国结核病诊断方面的专家，拥有丰富的结核病诊断和检测相关知识和经验。中国防痨协会理事长、中国疾病预防控制中心副主任刘剑君教授，也在百忙中应邀为本书作序，提出了很好的意见。本书编写团队中的20余位专家各展所长，对自己的工作经验、近年来国内外结核病诊断的新技术、新方法作了详尽的介绍。同时，本书也得益于首都医科大学附属北京胸科医院的逄宇教授、上海德达医院的张军主任、上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院的王海英主任、河南省胸科医院的李铮老师、复旦大学附属华山医院的蒋晓飞教授等人直接或间接的帮助；也感谢上海市（复旦大学附属）公共卫生临床中心的宋言峥主任、张腾飞老师、魏剑浩老师、苏俊老师和金鑫老师等同事的帮助。在此，一并致以衷心的感谢！
最后，限于我们学术水平、编写能力和学科发展的日新月异，恳请读者和同道们给予批评指正。
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