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編輯推薦: |
上版出版于2009年,得到读者的好评。全新改版,扩充了不少实验方案,增加了酶反应的背景知识,系统性和实用性增强。
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內容簡介: |
《酶学实验手册》(原著第二版)对*版酶的测定方法进行了补充完善,内容涉及酶反应、酶测定理论、酶学实验操作、酶的固定化方法及相关技术应用等实用性很强的内容,是一本可操作性很强的实验室酶学手册。在内容编排上体现了下列特色: ①系统介绍酶学实验方法,列出80多种酶及复合体的测定方法; ②详细介绍蛋白质结合和固定化酶的测定方法; ③对于酶催化的反应及酶本身给出了详细的背景知识; ④聚焦于解决实验方法中的难点。 作者Hans Bisswanger教授长期从事酶学领域的研究而且有着几十年的教学经验,他在总结教学实践和科学研究的基础上写成本书。本书可供生物化学、分子生物学、发育生物学、生物医学工程等领域的研究生和高年级本科生阅读,也可供上述领域研究人员参考。
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關於作者: |
刘晓晴,首都师范大学生命科学学院,教授。担任生物化学、蛋白质工程的教学工作。研究方向主要在:蛋白质的结构与功能的关系;环境酶的研究和利用;化学酶法合成有潜在应用价值的药物。
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目錄:
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1概述 2酶学分析的一般特性 2.1酶学实验的基本要求004 2.2酶学测定必须遵循什么?006 2.2.1反应级数006 2.2.2酶学反应级数的重要性008 2.2.3酶反应速率的测定010 2.2.4米氏方程022 2.2.5酶的抑制025 2.2.6多底物反应030 2.2.7酶学实验的必要条件032 2.3仪器方面045 2.3.1光谱方法045 2.3.2电化学方法062 2.3.3放射性标记法065 2.3.4其他方法065 2.4偶联酶反应理论066 2.4.1双偶联酶反应066 2.4.2三偶联反应069 2.5底物测定069 2.5.1终点法070 2.5.2偶联酶反应的底物测定071 2.5.3动力学方法测定底物071 2.5.4酶的循环072 3酶学检测实验 3.1酶的命名075 3.2酶实验操作中的注意事项077 3.3特殊酶实验080 3.3.1氧化还原酶,EC 1 080 3.3.2转移酶,EC 2 116 3.3.3水解酶,EC 3 130 3.3.4裂解酶,EC 4 166 3.3.5异构酶,EC 5 173 3.3.6连接酶类合成酶),EC 6 177 3.3.7多酶复合体的检测180 3.3.8底物测定185 3.4酶性质的测定188 3.4.1蛋白质定量188 3.4.2磷酸测定199 3.4.3糖蛋白测定200 3.4.4蛋白质与二甲基辛二硝酸二盐酸酯交联201 3.4.5酶溶液浓缩202 3.5酶免疫测定207 3.5.1放射性免疫测定207 3.5.2非竞争固相酶免疫测定208 3.5.3竞争固相酶免疫测定208 3.5.4酶免疫测定方法及固定化技术210 4结合测定 4.1不同类型的结合215 4.1.1总论215 4.1.2如何识别专一可逆性结合?216 4.1.3实验方面217 4.2利用大小差异的结合测定219 4.2.1平衡透析220 4.2.2结合实验评估224 4.2.3超滤225 4.2.4凝胶过滤225 4.2.5超速离心226 4.3光谱法227 4.3.1示差分光法228 4.3.2荧光分光法233 4.4其他结合测定法237 4.4.1放射性标记法237 4.4.2表面等离子共振法237 5酶的技术应用 5.1酶的固定化模式239 5.1.1吸附法240 5.1.2包埋法241 5.1.3微囊法241 5.1.4交联法242 5.1.5固相载体共价固定法243 5.2酶的固定化实验245 5.2.1尼龙珠微量包埋245 5.2.2聚丙烯酰胺包埋246 5.2.3玻璃表面共价固定化247 5.2.4可控孔洞玻璃表面共价固定化249 5.2.5聚酰胺共价固定化251 5.2.6聚酯固定化255 5.2.7对苯甲磺酰氯辅助的碱性水解、活化与固定化257 5.2.8羰基二咪唑参与的碱解、活化与固定化258 5.3固定化酶的分析259 5.3.1通则259 5.3.2固定化酶的连续光度测定260 5.3.3与固定化酶反应的辅助因子261 5.4酶反应器262 5.4.1批式反应器(搅拌罐式反应器)263 5.4.2膜反应器263 5.4.3固定床反应器263 5.4.4固定化细胞264 5.5生物传感器264 5.5.1酶电极264 5.5.2免疫电极267 5.5.3其他生物传感器267 5.6固定化酶用于治疗268 附录按照EC编号的酶列表 索引
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內容試閱:
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第一版的主要内容,包括酶的一般特性、特殊酶的检测方法和相关测定,如蛋白质的测定和酶固定化,以及仪器等方面,在第二版中依然保留。另外,考虑到方法的关注度和多样性,酶的检测和测定中,把测定糖蛋白和无机磷也包含了进来。酶的特性对于酶检测的条件是非常重要的,比如是否需要辅助因子、分子的大小、聚集状态、动力学常数和最适pH等也被提到,但是并没有提供所有的已知数据。事实上,在过去的这些年中,由于基因技术突飞猛进的发展,积累了大量的数据,同一种酶的特性由于其生物体的来源不同也可以有很大的不同。对于实际的酶检测,这样大量的数据可能干扰大于帮助,因此,只有一个或几个代表性的酶的种类被提到,优先选择的是人类或哺乳动物来源的酶。实验中应注意的事项,主要关注的是所描述方法经常出现的误解和可能的偏差。 应用于分子生物学和基因技术中的酶(如限制性内切酶和聚合酶)没有包括在内,在相应研究领域的教科书和手册中有大量的描述,但是这些酶的操作和测定条件也是遵从同样的原则。对于RNA酶(核糖体酶)、抗体酶、人造酶(如衍生于环糊精或冠醚)以及定点突变修饰的酶也是同样没有涉及。 本书的整体设计有了很大的提高,如部分文字加入了背景色;文本结构更加清晰;各部分的要点分别进行了总结和归纳。在网址www.wiley-vch.dehomeenzymology中提供了所有图的动画作为补充材料,便于更好地理解部分抽象的内容。 还要强调一下,在酶的固定化一章中Klaus Meschel和Rain Figura作出了有价值的贡献。 Hans Bisswanger Tübingen,2011年2月
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