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| 內容簡介： |
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本书全面深入地介绍了褪黑激素联合脂肪源性干细胞对犬坐骨神经损伤的治疗效果。本书分为五章。第1章重点介绍了周围神经损伤和再生的特点、组织工程神经的应用，尤其对组织工程神经中种子细胞的选择作了较详细阐述；第2章较详细介绍了褪黑激素的生物学效应以及对干细胞增殖和分化的影响；第3章重点阐述了犬脂肪源性干细胞的分离、培养以及鉴定方法，包括试剂的准备和配制、基本的培养技术和要求；第4章全面系统地介绍了褪黑激素对犬脂肪源性干细胞体外增殖的影响，并对其机制进行了研究；第5章系统评价了褪黑激素和脂肪源性干细胞联合移植治疗犬坐骨神经损伤的效果，证实了褪黑激素对犬脂肪源性干细胞移植治疗外周神经损伤的促进作用。本书为临床犬外周神经损伤的治疗提供了新方法，具有一定的临床实践意义。
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| 目錄：
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第1章 周围神经的损伤与修复
1.周围神经损伤和再生的特点3
1.1周围神经损伤的特点3
1.2周围神经损伤的类型4
1.3周围神经损伤的病理变化5
1.4周围神经损伤的表现6
1.5周围神经再生的特点7
2.周围神经损伤的治疗10
2.1自体神经移植10
2.2同种异体神经移植11
2.3组织工程化神经移植12
第2章 褪黑激素与干细胞
1.褪黑激素的分泌合成与代谢29
1.1褪黑激素的来源和分泌29
1.2褪黑激素的合成与代谢30
1.3褪黑激素的受体类型及其分布特点32
2.褪黑激素的生物学作用36
2.1褪黑激素对时差与睡眠的影响36
2.2褪黑激素对免疫功能的影响36
2.3褪黑激素抗肿瘤作用38
2.4褪黑激素抗氧化和抗衰老作用39
2.5褪黑激素对繁殖系统的调节40
2.6褪黑激素对干细胞增殖与分化的调控作用41
第3章 犬脂肪源性干细胞体外分离培养及鉴定
1.实验材料51
1.1实验试剂51
1.2实验设备52
1.3主要试剂配制53
1.4实验动物55
2.实验方法55
2.1脂肪源性干细胞的分离与培养55
2.2脂肪源性干细胞多向诱导分化56
2.3脂肪源性干细胞表面marker的检测57
3.实验结果57
3.1犬脂肪源性干细胞体外培养的形态学观察57
3.2犬脂肪源性干细胞的多向分化能力59
3.3犬脂肪源性干细胞表面marker的鉴定61
4.讨论63
第4章 褪黑激素对脂肪源性干细胞增殖的影响
1.实验材料69
1.1实验试剂69
1.2实验设备70
1.3主要试剂配制70
2.实验方法71
2.1褪黑激素对脂肪源性干细胞增殖的影响71
2.2褪黑激素受体阻断剂对脂肪源性干细胞增殖的影响72
2.3ERK12通路阻断剂对褪黑激素介导脂肪源性干细胞增殖的影响73
2.4数据分析74
3.实验结果74
3.1不同浓度褪黑激素对脂肪源性干细胞体外增殖的影响74
3.2两种褪黑激素受体阻断剂对褪黑激素介导脂肪源性干细胞增殖的影响75
3.3MTT法检测ERK12通路阻断剂PD98059对脂肪源性干细胞活性的影响76
4.讨论77
第5章 脂肪源性干细胞联合褪黑激素对犬坐骨神经损伤修复的评价
1.实验材料83
1.1实验试剂83
1.2实验设备84
1.3实验试剂配制84
1.4实验动物86
2.实验方法86
2.1脂肪源性干细胞的培养86
2.2组织工程神经移植物的制备86
2.3犬坐骨神经缺损修复的实验分组87
2.4犬坐骨神经缺损的修复87
2.5动物行为学观察88
2.6辣根过氧化物酶（HRP）逆行示踪实验88
2.7组织学检查90
2.8腓肠肌检测90
2.9神经电生理检测91
2.10统计学处理92
3.实验结果92
3.1动物模型建立92
3.2术后实验动物行为学观察92
3.3HRP逆行示踪检测结果97
3.4神经纤维再生检测99
3.5腓肠肌恢复结果102
3.6神经电生理检测105
4.讨论105
参考文献
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| 內容試閱：
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随着人们生活水平的提高，饲养名贵犬的家庭越来越多。然而，外伤、骨折、肿瘤等均可引起犬坐骨神经损伤，并且缺损后的神经生长速度慢、效应器和感受器萎缩快，因此周围神经损伤后的再生和修复就成为兽医临床的研究热点。近年来，组织工程技术的迅速发展为周围神经的修复带来了新的希望，其中理想种子细胞的获得是构建组织工程神经的前提和基础。脂肪源性干细胞（Adipose stem cells，ADSCs）是具有多向分化潜能的成体干细胞，在特定环境下可以向雪旺细胞（Schwann cells，SCs）分化，同时，脂肪源性干细胞还具有来源广泛、取材简便、并发症少、增殖速度快、扩增稳定等优点，因此常作为种子细胞来修复损伤的外周神经。但是损伤组织处的微环境含氧量和pH值均较低，易造成移植的干细胞发生凋亡。因此，脂肪源性干细胞在体内有效增殖是提高其修复能力的关键。褪黑激素（Melatonin，Mel）是松果体内合成的一种吲哚类激素，参与调控机体的昼夜节律、改善睡眠质量，具有抑制肿瘤生长、抗氧化和抗细胞凋亡等广泛的生物学效应。研究证实，褪黑激素对干细胞增殖和分化具有重要的调控作用。本书首先研究了褪黑激素对犬脂肪源性干细胞增殖的影响，随后将褪黑激素孵育的脂肪源性干细胞复合神经支架移植入犬坐骨神经缺损处，3个月后检测了犬坐骨神经损伤后的修复效果。本书的实验内容受到国家自然科学基金（No.U1504325）的资助，整个实验分为犬脂肪源性干细胞的分离培养与鉴定、褪黑激素对脂肪源性干细胞增殖的影响、脂肪源性干细胞联合褪黑激素对犬坐骨神经损伤修复的评价。
综上所述，褪黑激素能够促进犬脂肪源性干细胞的增殖，且该作用是褪黑激素通过MT1受体激活ERK信号通路来发挥；褪黑激素对脂肪源性干细胞移植修复犬坐骨神经损伤具有明显的促进作用。因此，兽医临床上治疗犬坐骨神经损伤时，可以考虑移植的种子细胞——脂肪源性干细胞用褪黑激素进行孵育。本书为犬坐骨神经损伤的治疗提供了实验依据。
特别感谢张自强博士在实验设计、图片加工处理等方面提供的帮助。感谢研究生黄婷婷同学在实验实施过程中所作的贡献，感谢潘丽同学对书稿的认真校对；感谢邓雯教授对本书的指导，感谢吕琼霞、陈晓光、朱雪敏、位兰博士对实验实施提供的帮助。
限于笔者水平，书中难免有不足之处，恳请读者对本书提出批评和改进意见。
著者
2017年2月
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