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內容簡介:
本书为《蛋白质纯化指南》(Guide to Protein Purification)第二版的中文译本。原著由来自于美、德、英、澳等国家著名大学、科研机构或生物技术公司的70多位蛋白质科学领域内的知名专家撰写,对蛋白质纯化相关的技术、材料、试剂、设备等进行了详细介绍。第二版由Elsevier出版集团于2009年出版,对1990年第一版问世以后该领域出现的各种新的技术和方法着重阐述。全书12部分44章,包括建立蛋白质纯化程序,常用技术,重组蛋白质的表达纯化,提取物和亚细胞组分的分离,详细纯化步骤(批量法、层析法、亲和法、电泳法),膜蛋白和糖蛋白的纯化,纯化蛋白质的特性等内容。
目錄 :
前言
撰稿人
第1章序言
第1章为什么要纯化酶?
第1部分制定纯化流程
第2章蛋白质纯化的策略与考虑因素
1?总则
2?蛋白质来源
3?制备提取物
4?大批量纯化步骤
5?纯化的精纯过程
6?结论
参考文献
第3章生物信息学在蛋白质纯化设计中的应用
1?氨基酸序列中的重要信息
2?无法从序列中预知的信息
3?结论
参考文献
第4章准备纯化工作简表
1?引言
2?脚注的重要性
3? SDS?PAGE对分析主要蛋白质分离组分的价值
4?一些常见的错误和问题
第2部分操作蛋白质和酶的常规方法
第5章建立一个实验室
1?配套材料
2?检测和分析的必要条件
3?蛋白质分级分离的必要条件
第6章缓冲液:原理和实践
1?引言
2?理论
3?缓冲液的选择
4?缓冲液的制备
5?挥发性缓冲液
6?广谱缓冲液
7?缓冲液储存液的配方
参考文献
第7章酶活性的测定
1?引言
2?催化活性的原理
3?酶活性的检测
4?反应分析混合物的组成
5?讨论
参考文献
第8章蛋白质定量
1?引言
2?试剂配制的一般性指导
3?紫外吸收光谱分析
4?基于染料的蛋白质分析方法
5?考马斯亮蓝蛋白质浓度分析法
內容試閱 :
第1章序言第1章序言
怀着极大的敬意,我们在第二版将本书第一版完整的第1章,由已故的Arthur Kornberg所著的“为什么要纯化酶”重印。Arthur是20世纪生物化学领域的一位巨匠,他的强项就是酶学——在阅读本章节时,读者们将充分领会到个中缘由。Arthur的言语中洋溢着他对于鉴定某种酶的活性,并且将该酶纯化至均质(homogeneity)从而可以直接研究其特性的热情。不过他显然也清楚地意识到了酶的“社会性”(social face),也就是酶类与其他细胞组分的相互作用——由于我们现在进而开始研究细胞组织结构的重要性,酶类的这种“社会性”使其获得了更多的关注。
自这个章节撰写近20年来,本领域取得了很多进展,特别是当其基因已知时,相应蛋白质的纯化变得容易很多。然而,当你在研究某种酶的催化特性时,或在解析某种蛋白质的结构时,或是鉴定可能的调节因子时,“纯度,纯度,还是纯度”的告诫依然是极有意义的。当试图了解一个新近发现的细胞反应中的酶类,或是参与某个细胞过程的蛋白质时,蛋白质的纯化依然是头等重要的事情。因此,不管是第一次读,还是重读回味,Arthur所著的精彩明晰的章节都会让你有所收获。
Murray P? Deutscher
徐俊杰译蛋白质纯化指南原书第二版第1章为什么要纯化酶?
第1章
为什么要纯化酶?
Arthur Kornberg已故
“不要把你纯粹的思想浪费在不纯的酶上!”,这是酶学与化学实践的核心人物Efraim Racker的告诫。这句话只是想告诉我们,在将感兴趣的酶从由其他的酶和物质组成的粗制细胞提取物中分离纯化出来之前,试图研究该酶是如何催化一种物质转化为另一种物质通常都是在浪费时间。从破裂的肝脏、酵母或细菌细胞中释放出来的上千种不同酶类的混合物可能含有一些指导原料进行其他重排反应的酶类和特定酶功能的产物。只有当我们将酶纯化到检测不到其他酶活性的程度,我们才能确信,一种单一类型的酶分子仅仅是催化物质A转化成物质B。只有这时,我们才能了解这种酶是如何进行反应的。
纯化酶的努力所获得的回报在Otto Warburg于19世纪30年代发表的一系列振奋人心的文章中得到了阐明。凭借着出自他在Berlin?Dahlem的实验室的诸多酶纯化的方法和准则,呼吸过程和糖酵解